Cómo cultivar micelio en grano desde placa Petri  o medio líquido: Guía Completa

Expandir micelio sobre grano esterilizado es un paso crucial en el cultivo de hongos.
En este artículo te guiaremos a través del proceso partiendo de dos posibles inóculos: micelio en placa Petri y en medio líquido. También te vamos a compartir algunos  consejos útiles para que asegures un crecimiento saludable y vigoroso del micelio en grano. 

Materiales necesarios

1. Inóculo: Micelio en placa Petri o en medio líquido.
2. Grano (trigo, avena u otros cereales).
3. Autoclave u olla a presión.
4. Agua potable.
5. Frascos de vidrio con puerto de inyección e intercambio gaseoso  o bolsas de polipropileno con microfiltro.
6. Campana de flujo laminar, SAB,  glovebox o mechero Bunsen
7. Alcohol isopropílico al 70%.
8. Cuchilla estéril o bisturí.
9. Guantes de látex
10. Cinta microporosa.

PREPARACIÓN DEL GRANO

1. Selección del grano: El grano aportará los nutrientes necesarios para el crecimiento del micelio. A la hora de elegir qué grano utilizar, es importante buscar aquellos con mayor disponibilidad en tu zona, priorizando siempre los granos de temporada. Los más utilizados por cultivadores son la avena, el trigo y el centeno.
2. Lavado del grano: Resulta un proceso fundamental para quitar impurezas como polvo, tierra, granos en mal estado, etc.  Lavar hasta que el agua salga clara.
3. Hidratación del grano: Este paso es crucial para asegurar que el grano tenga suficiente humedad, para aportarla durante el crecimiento del micelio. Por otro lado, existen endosporas presentes en algunos granos de cereal. La hidratación permite que estas germinen, facilitando su eliminación, ya que en ocasiones suelen resistir los procesos térmicos.
   Un grano bien hidratado se ablandará lo suficiente como para que puedas marcarlo con la uña (pero mantendrá su estructura firme, sin desarmarse). Si luego de la hidratación los granos siguen demasiado duros, previo a esterilizar podemos darles una cocción para alcanzar la textura adecuada (paso 4).
4. Cocción del grano: Si después de la hidratación, los granos siguen demasiado duros, es posible darles una cocción para alcanzar la textura adecuada antes de autoclavar. Los tiempos de cocción variarán en función de la especie de grano, lote, etc. También de la dureza del grano post-hidratación. En algunos casos, esta cocción no será necesaria. Será tu trabajo encontrar el punto justo en el grano que utilices. En la tabla comparativa de granos te dejamos algunos márgenes de referencia.
5. Secado superficial: Escurrir el grano con un colador o malla. Una vez escurrido, podés esparcirlo sobre algún paño absorbente, malla o bandeja para terminar su secado. La idea es que se seque superficialmente pero mantenga humedad en su interior. Este proceso puede llevar algunas horas, ya que depende de las condiciones ambientales. El punto ideal se alcanza cuando al agarrar un puñado de grano, este no queda pegado entre sí, ni en tu palma. Con este secado prevenimos el exceso de humedad en los envases de cultivo.

Recordá: Los datos plasmados en este cuadro son meramente orientativos.

ESTERILIZACIÓN DEL GRANO

1. Empaque del grano: Colocar el grano en frascos de vidrio o bolsas de cultivo, llenando aproximadamente 2/3 de su capacidad si son frascos o 2/5 si son bolsas con microfiltro. Si utilizás frascos de vidrio recordá hacerles puertos de intercambio gaseoso en sus tapas y cubrirlos con cinta microporosa.
2. Esterilización: Esterilizar el grano en autoclave a 15 psi durante 60 minutos. Si se utiliza olla a presión aumentar  este tiempo a 1 ½,  2 horas. Este paso es fundamental para eliminar cualquier microorganismo que pueda competir con nuestro micelio.
3. Enfriamiento: Dejar que los frascos o bolsas se enfríen completamente a temperatura ambiente antes de proceder con el siguiente paso.

INOCULACIÓN DE GRANO CON MICELIO

1. Preparación del área de trabajo: Es fundamental asegurar que el área de trabajo esté estéril. Puede utilizarse una campana de flujo laminar, SAB (Still Air Box, es decir una caja con agujeros para introducir las manos) o una Glovebox. En el caso de no contar con ninguno de estos elementos, la inoculación puede hacerse utilizando un mechero Bunsen o en la zona de la cocina de gas, con la mesada perfectamente desinfectada e inoculando cerca de las hornallas encendidas al mínimo.
2. Desinfección: Limpiar manos, herramientas y superficies de trabajo con alcohol isopropílico al 70%.
3. Inoculación: Transferencia del micelio.
   • Placa Petri: Usando una cuchilla estéril y flameando en cada paso, cortar trozos de micelio de 1cm². Añadir un trozo de micelio por cada 125 ml de grano esterilizado. Se recomienda trabajar rápido y con precisión, manteniendo el área lo más estéril posible para evitar contaminaciones.
   • Medio líquido: Limpiar con alcohol 70% la superficie por la que haremos la punción para inyectar el micelio en el frasco o bolsa. Inocular calculando 10 ml por cada litro de grano esterilizado. Si te interesa aprender a hacer tu propio medio líquido, podés consultar el tutorial «Consejos para Realizar una Buena Cultura Líquida Partiendo de Micelio en Placa Petri«.
4. Sellado: Cerrar los frascos o bolsas de cultivo. Sellar con cinta microporosa de ser necesario para permitir el intercambio de gases.

INCUBACIÓN

1. Temperatura: Incubar los frascos o bolsas en un lugar oscuro a una temperatura de 25°C. Es recomendable que te cerciores de los parámetros óptimos de incubación de la cepa con la que vas a trabajar.
2. Observación: Revisar periódicamente el crecimiento del micelio. En unos días, deberías verlo extendiéndose por el grano.
3. Agitación: Puede ocurrir que el micelio crezca dejando algunas zonas con difícil expansión. En este caso, podés agitar el envase para redistribuir el micelio y mejorar el crecimiento del mismo.

ALGUNOS CONSEJOS

• Esterilidad: Mantener siempre la limpieza y esterilidad durante todo el proceso para evitar la contaminación.
• Hidratación: No sobrehidratar el grano; la humedad excesiva puede causar contaminación.
• Paciencia: La expansión completa del micelio puede tardar más de 2 semanas; sé paciente y no apresures el proceso. Cultivar es también una práctica de contemplación, un ejercicio de paciencia y sensibilidad.
• Condiciones óptimas: Mantener la temperatura constante para un mejor crecimiento del micelio. Evitá la exposición a la luz, ya que el micelio puede estresarse.

Expandir micelio sobre grano esterilizado partiendo de una placa Petri o medio líquido es un proceso meticuloso pero gratificante. Siguiendo estos pasos y consejos podrás cultivar un micelio saludable que servirá como base para tu cultivo de hongos. Ya no tenés excusa para comenzar a cultivar tus propias setas. Si necesitás placas Petri o medio líquido de tu especie favorita, podés consultar el catálogo de nuestra tienda online en Argentina.

¡Buen cultivo y gracias por leernos!