El cultivo líquido es una técnica esencial en micología para expandir y multiplicar el micelio de hongos, proporcionando una base para la producción de esporas, la inoculación de sustratos o la creación de bioproductos. En este artículo de lamicoteca.com, te ofrecemos una guía detallada y paso a paso para realizar una cultura líquida exitosa partiendo de micelio en placa Petri.
Descubrí los materiales necesarios, los procedimientos de esterilización y las mejores prácticas para asegurar un crecimiento óptimo del micelio, desde la preparación del medio de cultivo hasta la incubación y el almacenamiento. Ideal para aficionados y profesionales de la micología que buscan mejorar sus técnicas de cultivo de hongos comestibles.
MATERIALES NECESARIOS
- Micelio de hongo en placa Petri (¡podés adquirir nuestras genéticas en la tienda de la Micoteca!)
- Frascos de vidrio o botellas de cultivo estériles
- Solución de cultivo líquido (en esta guía utilizaremos caldo de papa, dextrosa y levadura (PDY)
- Mechero Bunsen o lámpara de alcohol
- Pinzas estériles o asa de inoculación
- Batas de laboratorio, guantes y mascarilla
- Autoclave u olla de presión para esterilización
- Agitador magnético o rotador (opcional pero recomendado)
Paso 1: Preparación del Medio de Cultivo Líquido
- Preparación del Caldo de Cultivo:
- Para el caldo de papas, dextrosa y levadura (PDY), hervir 200 grs. de papas peladas en 1 litro de agua durante 30 minutos.
- Filtrar el líquido y añadir 20 grs. de dextrosa (glucosa) al filtrado.
- Añadir 2 grs. de levadura y homogeneizar la mezcla. Puede utilizarse tanto levadura nutricional como fresca.
- Completar con agua hasta alcanzar 1 litro de volumen total.
- Esterilización del Medio:
- Vertir el caldo preparado en frascos de vidrio o botellas de cultivo, llenando hasta 3/4 de su capacidad.
- Cerrar los frascos con tapas sueltas o cubrirlas con papel de aluminio.
- Esterilizar los frascos en autoclave a 121°C durante 20 minutos. Si no se dispone de un autoclave, puede utilizarse una olla de presión siguiendo las instrucciones del fabricante.
- Dejar enfriar el medio a temperatura ambiente antes de proceder.
Paso 2: Preparación del Inóculo de Micelio
- Condiciones de Aseptia:
- Trabajar en una campana de flujo laminar o cerca de un mechero Bunsen para mantener el ambiente estéril.
- Desinfectar todas las superficies de trabajo y las herramientas con alcohol al 70%.
- Obtención del Micelio:
- Abrir la placa Petri con micelio en un entorno estéril.
- Con pinzas estériles o un asa de inoculación, cortar pequeños trozos del micelio de la placa (aproximadamente 0.5 cm²).
Paso 3: Inoculación del Medio Líquido
- Transferencia del Micelio:
- Abrir los frascos de cultivo en un ambiente estéril.
- Introducir los trozos de micelio en el medio de cultivo líquido usando las pinzas o el asa de inoculación.
- Cerrar inmediatamente los frascos para evitar la contaminación.
Paso 4: Incubación y Crecimiento del Micelio
- Condiciones de Incubación:
- Incubar los frascos a una temperatura adecuada para el hongo específico (generalmente entre 22-27°C).
- Colocar los frascos en un agitador magnético o rotador para asegurar una buena aireación y distribución del micelio. Si no se dispone de estos equipos, agitar los frascos manualmente cada 12 horas.
- Monitoreo del Crecimiento:
- Es importante observar el crecimiento del micelio diariamente. El medio debe volverse turbio. Se observarán fragmentos de micelio flotando.
- El tiempo de crecimiento varía según la especie de hongo, pero usualmente toma entre 5 a 10 días para alcanzar un buen volumen de micelio.
Paso 5: Uso y Almacenamiento de la Cultura Líquida
- Verificación de la Pureza:
- Antes de usar la cultura líquida, debemos asegurarnos que no haya signos de contaminación (cambio de color, olores inusuales…).
- Uso de la Cultura:
- Puede utilizarse la cultura líquida para inocular sustratos sólidos o para otros fines específicos. Usar una jeringa estéril para transferir el micelio líquido.
- Almacenamiento:
- Si no se usa de inmediato, almacenar la cultura líquida en un refrigerador a 4°C. La viabilidad puede mantenerse por varias semanas (24 semanas en condiciones óptimas).
Consejos Adicionales
- Higiene y Seguridad: Trabajar siempre con guantes y mascarilla para minimizar el riesgo de contaminación.
- Revisión de Procedimientos: Revisar regularmente los procedimientos de esterilización y asepsia para asegurar la calidad de los cultivos.
- Registro y Documentación: Es fundamental mantener un registro detallado de los pasos y observaciones durante el proceso de cultivo para mejorar y ajustar las técnicas en el futuro.
Siguiendo estos pasos y consejos, podrás lograr cultivos líquidos exitosos y de alta calidad a partir de micelio en placa Petri, optimizando así tu producción micológica.
El micelio tiene la capacidad de adaptarse, ¡sé como el micelio, mi amigx!